# GMP 자료 🐤

엔도톡신 챌린지 시험(Endotoxin Challenge Test)

지캣담당자 2025. 4. 24. 15:16

🔬 열침투시험용 엔도톡신 (Endotoxin for Depyrogenation Study)

✅ 목적

터널멸균기에서 설정한 온도(주로 250°C ±10°C / 30–60분)에서 **엔도톡신 제거(Log Reduction Value, LRV ≥ 3 또는 4)**가 제대로 이루어졌는지를 평가하기 위한 시험용 엔도톡신입니다.

🧪 사용되는 엔도톡신의 특성

항목 기준 및 설명
형태 Control Standard Endotoxin (CSE) 또는 Raw Endotoxin
기원 E. coli O55:B5 또는 O113:H10 유래 (LPS 기준)
형태 종종 Dried LPS 또는 lyophilized 상태로 공급
단위 EU (Endotoxin Unit) / vial 또는 EU/mg
용도 바이알, 앰플 등에 도포 후 건조하여 사용
열 저항성 일정한 열 저항력(LRV 가능) 확인된 로트 사용 필요
확인시험 BET(LAL) Assay, Gravimetric 확인 포함

📌 대표 공급 업체

업체 제품 예시 특징
Charles River CSE, RSE 열저항성 확인된 pyrogen 제품군
Lonza (formerly Associates of Cape Cod) Pyrostandard™ Endotoxin Challenge Vial 제공
Wako LPS E. coli O111:B4 생물학적 LPS, 적정한 EU 가능
Sigma-Aldrich L2630 등 연구용 LPS도 일부 사용 가능 (밸리데이션 필요)

🧴 사용 방법 (시험 준비 절차)

  1. 10 mL 바이알 또는 앰플 내면에 엔도톡신 도포
    • 정확히 1,000 EU 또는 10,000 EU/vial 수준 도포
  2. 건조 (Drying Oven 또는 Vacuum Desiccator)
  3. 터널멸균기 내 **가장 열이 약한 위치(Cold Spot)**에 위치
  4. 멸균 사이클 수행 (예: 250°C, 30분)
  5. 회수 후 복원 (Reconstitution) 및 LAL 시험 수행
  6. LRV 계산:

일반 기준: LRV ≥ 3 또는 4 (1,000 → 1 EU 이하)

🧾 가이드라인 기준

기준 문서 주요 내용
USP <1228> / <1229> 열비발열 시험 절차 및 LRV 요구조건
FDA Guideline for Sterile Drug Products Depyrogenation validation 필요
PDA TR3, TR1 터널멸균기 Validation 항목 및 엔도톡신 비활성화 요구
EU GMP Annex 1 Pyrogen 제거에 대한 검증 필요 명시

💡 참고사항

  • 엔도톡신은 **내열성이 강한 불활성 물질(LPS)**이므로 건열 멸균만이 비활성화 가능.
  • **습열 멸균기(Autoclave)**로는 엔도톡신 제거가 어렵습니다.
  • 엔도톡신 도포량 및 균일성은 밸리데이션 문서에 기록해야 합니다.

 

🧪 대표 엔도톡신 제품 (모델명)

제조사 제품명 / 모델명 설명
Charles River CSE (Control Standard Endotoxin) USP/EP 적합, 정확한 EU 정량 가능
Lonza (Cape Cod) Pyrostandard™ 엔도톡신 Challenge Vial 형태 제공
Wako (Fujifilm) E. coli O111:B4, LPS 연구용 LPS, EU 보장 필요
Sigma-Aldrich L2630, L3024 E. coli 유래 정제 LPS, 일반 연구용
Associates of Cape Cod RSE (Reference Standard Endotoxin) 공인 LAL Kit 교정용
BioWhittaker (Cambrex) Control Standard Endotoxin vials 고정된 EU/vial 제공

⚠️ 시험용으로 사용 시 반드시 LAL 적합성 확인 및 열 저항성 확인 로트 사용 필요

🧪 LAL 시험장비 (엔도톡신 측정장비)

엔도톡신 시험은 LAL Test (Limulus Amebocyte Lysate) 기반으로 수행되며, 다음과 같은 장비가 사용됩니다.


제조사 장비명 시험 방식 특징
Charles River Endosafe® nexgen-PTS™ 포터블 LAL 카트리지 시스템 현장 측정용, 빠른 결과
Lonza PyroTec™ PRO 로봇 자동화 LAL 시스템 고처리량, 21 CFR Part 11 지원
Lonza PyroSense™ / PyroTurb 터비도메트릭 / 컬러메트릭 표준 정량 분석
Wako Toxinometer ET-6000 겔 클로팅법 기반 자동 분석기 온도 제어, 다중 시료 측정
Associates of Cape Cod (ACC) Toxinometer® II / Pyros Kinetix® Kinetic turbidimetric 고감도, 소량 시료 분석

🔍 LAL 시험 방법 종류

시험 방법 설명 사용 예시
Gel-Clot 응고 여부 관찰 간단/정성적 시험
Chromogenic 색 변화 측정 정량, 자동화 가능
Turbidimetric 탁도 변화 측정 고정밀 정량, 멀티 시료
Cartridge-based (Endosafe) 일회용 카트리지 현장 정량 시험, 15분 결과

📌 시험 예시 (터널멸균기 PQ 시)

  1. 도포용 CSE 엔도톡신 바이알 준비 (예: 10,000 EU/vial)
  2. 바이알에 도포 후 건조
  3. 터널멸균기 내 최저온 위치에 위치
  4. 250°C / 30–60분 멸균 사이클 수행
  5. 회수 후 재용해
  6. LAL 시험 장비로 잔류 EU 측정
  7. LRV 계산 (예: 10,000 → 1 EU → LRV 4)

 

📄 SOP 예시: 엔도톡신 비활성화 시험

📌 1. 목적 (Purpose)

터널멸균기에서 설정된 건열 멸균 조건(예: 250°C, 30분)에서 엔도톡신의 비활성화 성능을 검증하여 장비의 적격성을 평가한다.

📌 2. 적용 범위 (Scope)

이 SOP는 터널멸균기를 사용하는 모든 제약 제조소의 비열원화(Depyrogenation) 밸리데이션에 적용된다.

📌 3. 책임 (Responsibility)

  • QA팀: 시험 검토 및 승인
  • QC팀: LAL 분석 수행
  • Validation팀: 시험 준비 및 실행

📌 4. 장비 및 시험재료 (Materials & Equipment)

  • Control Standard Endotoxin (예: Charles River CSE)
  • 10 mL 무균 바이알
  • 건조기 또는 진공 건조장치
  • 터널멸균기
  • 엔도톡신 분석기 (예: Endosafe nexgen-PTS, PyroTec PRO)
  • 시험 기록지, LAL 시약

📌 5. 시험 전 준비 (Pre-Test Preparation)

  1. 도포용 엔도톡신 희석
    • CSE를 무균수로 희석하여 목표 EU 농도(예: 10,000 EU/mL)로 맞춤
    • 멸균된 10 mL 바이알 내면에 100 µL 도포 → 1,000 EU/vial
  2. 바이알 건조
    • 무균 조건에서 오픈 상태로 60℃ 건조기에서 2시간 이상 건조
    • 또는 진공 상태에서 1시간 이상 건조
  3. 시험용 바이알 분류
    • 시험군: 터널멸균기에 투입할 바이알
    • 대조군: 미멸균 상태에서 보관, 추후 회수량 비교용

📌 6. 시험 절차 (Procedure)

    1. 바이알 배치
      • 터널멸균기의 냉점(Cold Spot)과 온점에 바이알 수평 배치
      • 일반적으로 시험군 3~5개, 대조군 3개 사용
    2. 멸균 사이클 가동
      • 설정 온도: 250℃ ±10℃
      • 시간: 30분 이상 (가열/유지/냉각 포함)
    3. 멸균 완료 후 회수
      • 바이알을 무균 조건에서 회수
      • 엔도톡신 복원: 멸균수 1 mL 첨가 후 30분 이상 흔들어 재용해
    4. LAL 시험 수행
      • 장비: Endosafe PTS 또는 LAL 겔 클로팅법
      • 시험군과 대조군의 EU값 정량 분석
    5. LRV 계산

📌 7. 수용 기준 (Acceptance Criteria)

      • LRV ≥ 3.0 (1,000 EU → 1 EU 이하로 감소)
      • 모든 시험군에서 잔류 엔도톡신이 검출 한계 이하일 것

📌 8. 문서화 (Documentation)

      • 시험기록지에 모든 데이터를 기록
      • 회수 및 분석 결과는 Validation 보고서에 포함
      • CSE CoA 및 장비 교정이력 첨부

📌 9. 참고 문서 (Reference)

    • USP <1228> & <85>
    • FDA Sterile Guidance (2004)
    • PDA TR1, TR3
    • EU GMP Annex 1

지캣에서는 건열멸균기, 터널멸균기 등 Validator를 이용하여 장비 적격성평가를 진행하고 있습니다.

자세한 내용은 아래 홈페이지를 참고해주세요.

http://www.gmpcat.com

 

지캣 GMP 컨설팅 및 밸리데이션

 

www.gmpcat.com

 

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